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    1.母種培養基制作

    A 母種培養基配方：馬鈴薯200-250克，葡萄糖15-20克，瓊脂20克，蛋白胨5克，磷酸二氫鉀2克，硫酸鎂1克，VB1五片，VB6一片，VB12一片，水1000毫升，PH6.8或自然。

    B 制作及滅菌：土豆煮沸25分鐘過濾取濾清液，加入其它輔料微火溶化，趁熱加入空白試管中，18x180的試管加8毫升，20x200的試管加10-12毫升。每7-10支試管用繩子捆扎，試管口端包扎牛皮紙或無紡布。采用手提式高壓鍋的，排氣閥不要關閉，當燒至蒸汽從排氣閥穩定冒出2-3分鐘后，關閉排氣閥，待壓力升至0.5公斤時，打開排氣閥放掉冷空氣，讓壓力回至零，重新關閉排氣閥升壓至1.4公斤開始計時，滅菌30-32分鐘結束。讓其自然降壓降溫到80-90度時，輕輕地打開鍋蓋，移開一條縫，讓鍋里的余熱把包扎試管的被蒸汽弄濕的牛皮紙烘干，在試管的溫度差不多60度時取出，一頭放在一根1.3-1.5厘米高的木條上，讓其自然冷卻后就成為斜面。
    添加瓊脂的培養基的特性：在95度時成為液體狀，低于45度時凝固成固體狀。瓊脂的這個特性，現在已被廣泛的應用于生物培養和植物組織培養。

    2.液體菌種的培養方法

    常見的有采用搖床來生產的搖瓶培養法和采用發酵罐來生產的深層培養法。若少量生產，可以用搖瓶培養法。深層培養需要一整套工業發酵設備，如鍋爐、空氣壓縮機、空氣凈化系統、發酵罐等，故投資大，只適用于工廠化的大規模生產。而搖瓶培養投資少，設備技術簡單，適合一般菌種廠生產使用。本節主要介紹搖瓶培養的技術方法。

    液體培養基配方：

    A 土豆200克，葡萄糖10克，蛋白胨3克，磷酸二氫鉀1.5克，瓊脂0.5克，維生素B1 二至五片，PH值6.8或自然，水1000毫升。土豆煮沸騰后25分鐘，過濾，加入其它營養輔料。

    B 免煮配方1：蛋白胨13克，葡萄糖15克，磷酸二氫鉀1.5克，瓊脂0.5克，維生素B1 二至五片，PH值6.8或自然，水1000毫升。

    C 免煮配方2：蛋白胨10克，酵母粉10克，玉米淀粉3克，葡萄糖10克，磷酸二氫鉀1.5克，瓊脂0.5克，Vb1-6片。PH6.8-7.水1000毫升。

    3.搖瓶振蕩培養技術

    培養液配制好后，裝入500mL容量的三角燒瓶中，每瓶裝量為100mL（旋轉式搖床裝量為350毫升），或者一個500毫升的鹽水瓶裝200-400毫升營養液，每瓶加入菜油5滴，起消泡作用。加棉塞后再包扎牛皮紙或無紡布封口，在1.4kg/cm2壓力下滅菌30-35分鐘，取出冷卻到30℃以下時，無菌條件下接入3-4塊約0.5厘米見方的斜面菌種，于20℃～22℃下靜置培養48-72小時，見菌種塊上菌絲萌發置于往復式搖床上振蕩培養，振蕩頻率為80～100次/分，振幅6cm～10cm。如果用旋轉式搖床，振幅4厘米，振蕩頻率為120～200轉／分。培養室溫控制在20℃～21℃，蟲草液體菌種的培養時間一般是在4天左右（食用菌在5-7天）。培養結束的標準是：培養液清澈透明，液基中懸浮著大量小菌絲球，并伴有各種菌類特有的香味。

    4.手搖培養液體菌種技術

    如果沒有搖床設備，可以用手搖來解決，每天搖2-5次，每次搖1-3分鐘，搖得多，菌絲也生長得快。可以把幾十個瓶子放在搖籃或吊床上一起搖。

    5.接種針

    用一根直徑2.5毫米的不銹鋼電焊條，前三分之一磨小，頭部磨尖，離針尖0.4-0.5厘米處用鋼鉗折彎90度就行，后面手把部分用塑料牙刷柄制作，方法是，將接種針尾端燒紅，插入牙刷柄即可。

    6.滅菌注意事項

    采用壓力鍋滅菌母種用試管培養基和三角瓶時，必須用蒸格隔開，家用壓力鍋矮，試管只能斜放。蓋上蓋后，等蒸汽從鍋中央的孔中冒出來10分鐘后，蓋上限壓閥，待限壓閥上汽后開始計時，需要35-38分鐘的滅菌時間，此時，應改為小火燒，維持限壓閥似起非起的狀態，一定要有少量蒸汽從中間的限壓閥中冒出，如沒有蒸汽冒出，那就會造成滅菌溫度不到位，滅菌不徹底。如果是滅菌米飯或小麥培養基，1公斤以上壓力60-90分鐘。

   7.批量生產栽培的滅菌 （袋栽平菇等食用菌的滅菌可進行參考。）

    裝好瓶袋后，除寒冷的冬天外，一般必須立即進行上鍋滅菌，將料袋堆積于滅菌平臺或灶倉內，料袋行之間必須留有空隙，以利蒸汽在料袋間穿透，不造成滅菌死角，最好用周轉筐。碼好堆后，蓋上雙層塑料薄膜，再蓋上無紡布保溫，最外層再覆上一層塑料薄膜，滅菌堆四周仔細壓上砂袋，防止蒸汽逃逸。通入蒸汽，用旺火盡快使料堆升溫至100度，料堆內蒸汽飽和時，覆蓋的薄膜會鼓起成氣包狀，剛開始時，需排掉堆內的冷空氣，料堆內才會慢慢的達到100度，此后，再維持6-10小時（食用菌10-12小時），才能達到徹底滅菌的效果。此時才可以停火，燜一天，待料溫下降至50-60度時出鍋為最好，盡量不要在料瓶溫度很高時出鍋。